摘要： 目的:探索CRISPR/Cas9基因编辑技术在构建亨廷顿病(Huntington's Disease,HD)细胞模型中的应用.方法:借助CRISPR/Cas9靶点设计网站对IT15基因进行分析并设计gRNA靶点序列,检测gRNA靶点序列的体外Cas9酶切活性.选择体外活性较好的一对gRNA靶点序列并装载到VK001-05打靶质粒上,根据靶点位置设计并构建50个CAG(Poly Q)重复且有EGFP和PuroR标记的Donor质粒.将打靶质粒和Donor质粒混合并借助转染试剂转染CATH-a细胞,提取转染后细胞基因组DNA鉴定gRNA靶点位置的基因型.结果:转染后CATH-a细胞的gRNA靶点位置准确无误地敲入50个CAG重复碱基.结论:研究进一步拓展了CRISPR/Cas9基因编辑技术在构建遗传性基因突变疾病模型方面的应用,同时也为未来临床治疗该类疾病提供了参考基础和研究平台.